♦ 기술개요
• DNA 상의 특정 부분을 타겟으로 하여 DNA를 검출하거나 정량하는 기술.
• 형광 염료(SYBR green 등) 혹은 형광 탐지 probe(TaqMan probe)를 첨가하여 PCR 증폭 산물의 증가를 실시간으로 모니터링할 수 있음.
• SYBR green은 PCR로 인해 합성된 이중나선의 DNA에 결합하여 형광을 발하고, TaqMan probe는 5‘ 말단에 형광 물질인 reporter가 붙고 3’ 말단에는 상쇄물질인 quencher가 결합되어 있는 형태로, probe가 주형 DNA에 결합되어 quencher와 떨어졌을 때 형광을 발함.
♦ 기술의 차별성
• PCR 증폭 cycle 마다 실시간으로 증폭 곡선이 만들어지며, PCR 반응이 끝남과 동시에 수치화 된 여러 값들을 통해 결과 분석이 가능함.
• 주형 DNA의 염기서열에 특이적인 primer와 probe를 사용하므로 일반 PCR에 비해 정확성이 높고, tube가 닫힌 상태에서 결과를 바로 분석하기 때문에 오염 확률이 낮음.
• 다수의 형광염료로 표지된 probe를 사용하여 여러 서열을 동시에 targeting 하여 분석할 수 있음.
• 역전사(reverse transcription) 과정을 통해 RNA를 cDNA로 만들어 정량할 수 있음.
